小鼠内脏组织样品研磨提取核酸、微生物

1970-01
近期的组织研磨和样品处理分享、讨论,我们邀请到了实验动物监测所老师给大家分享,内容是——小鼠内脏组织样品研磨提取核酸、微生物,研磨使用的仪器是洛尚(LAWSON)组织研磨仪
 
实例1:加裂解液直接匀浆
1、取适量组织装入离心管,组织尽量剪碎成小块;
 
2、在离心管中加入氧化锆珠数颗(一次性使用);
 
3、先加入Trizol(不建议加入太多 Trizol,液体体积过大影响匀浆效果),盖好管盖,装入洛尚(LAWSON)组织研磨仪适配器中,安装上机。
 
4、组织研磨仪研磨参数设置为一定转速,研磨时间为2~5min(不同组织研磨时间不同,脑1min,肝脏、脾脏和肾脏2min、肺脏比较难研磨需3~5min,可能更长,中间应停顿1~2次防止温度过高,研磨前最好先用液氮或放置在-80度冰箱预冷);
 
5、再加入适量Trizol至总体积;
 
6、后面步骤按Trizol说明进行。
 
实例2:先匀浆,再取一定量液体加裂解液进行核酸抽提,本protocol适用提取小鼠组织中的病毒的核酸
 
1、取适量组织装入离心管,组织尽量剪碎成小块,样品量较多时使用大离心管;
 
2、在离心管中加入氧化锆珠数颗,使用大离心管时,可以将氧化锆珠数量增加;
 
3、加入适量的灭菌PBS或生理盐水,总体积为离心管单管体积的1/3~1/2为好,盖好管盖,装入洛尚(LAWSON)组织研磨仪适配器中,安装上机(研磨前最好先用液氮或放置在-80度冰箱预冷)。